Реагент PyroSmart NextGen® для определения бактериальных эндотоксинов (рекомбинантный каскадный реагент, кинетический хромогенный метод), Associates of Cape Cod. Inc.
PyroSmart NextGen® – высокочувствительный рекомбинантный каскадный реагент (rCR) для количественного определения бактериальных эндотоксинов кинетическим хромогенным методом в соответствии с требованиями USP <86>. В Европейской фармакопее метод с использованием rCR может применяться как альтернативный фармакопейному методу Ph. Eur. 2.6.14 «Бактериальные эндотоксины» при условии соответствующей валидации.
Реагент представляет собой лиофилизированную смесь трех рекомбинантных компонентов ферментативного каскада – фактора C, фактора B и фермента, который активирует свертывание, вместе с хромогенным субстратом.
PyroSmart NextGen® обеспечивает количественное определение бактериальных эндотоксинов и может использоваться для анализа воды, сырья, промежуточной продукции, готовых лекарственных средств и медицинских изделий.
Принцип метода
Метод основан на активации рекомбинантного ферментативного каскада бактериальными эндотоксинами. В присутствии эндотоксина активируется фактор C, последовательно активирующий фактор B, и фермент, активирующий свертывание. Активированный фермент расщепляет хромогенный субстрат с образованием окрашенного продукта. Изменение оптической плотности регистрирует микропланшетный ридер, а концентрацию бактериального эндотоксина в исследуемом образце определяют по стандартной кривой. PyroSmart NextGen® не содержит фактора G, поэтому (1→3)-β-D-глюканы не активируют реакцию, что повышает специфичность определения бактериальных эндотоксинов.
Основные характеристики
- Метод: количественный кинетический хромогенный
- Тип реагента: рекомбинантный каскадный реагент (rCR)
- Диапазон стандартной кривой: 0,005–50 ОЕ/мл
- Максимальная чувствительность: 0,001 МЕ/мл – при использовании пробирочного анализатора Pyros Kinetix® Flex
- Температура реакции: 37 ± 1 °C
- Формат анализа: 96-луночный микропланшет
- Обработка результатов: автоматизированная
Проведение теста
- Перед проведением анализа микропланшетный ридер доводят до 37 ± 1 °C.
- Готовят стандарт эндотоксина, отрицательный контроль, изучаемые образцы и положительный контроль образца.
- Лиофилизированный реагент PyroSmart NextGen® восстанавливают 2,8 мл специального буфера для восстановления.
- Восстановленный реагент добавляют в лунки микропланшета с исследуемыми образцами, стандартами и контролями.
- Планшет помещают в микропланшетный ридер и производят кинетическое измерение при 37 ± 1 °C.
- Концентрацию бактериальных эндотоксинов в исследуемых образцах определяют по стандартной кривой.
Стабильность и хранение
Лиофилизированный реагент PyroSmart NextGen® хранят при температуре 2…8 °C. Срок годности – 3 года с даты производства при соблюдении рекомендованных условий хранения. После восстановления реагент PyroSmart NextGen® необходимо использовать в течение 3–20 минут при комнатной температуре. Хранение остатка восстановленного реагента для дальнейшего использования не предусмотрено изготовителем.
Комплексное решение для тестирования бактериальных эндотоксинов
Мы предлагаем полный набор компонентов для проведения анализа:
- Рекомбинантный каскадный реагент PyroSmart NextGen® (rCR)
- Буфер для восстановления реагента
- Контрольный стандарт эндотоксина (CSE)
- Вода для тестирования бактериальных эндотоксинов (LRW)
- 96-луночные микропланшеты
- Апирогенные наконечники
- Апирогенные пробирки
Преимущества
- Соответствие требованиям USP <86>
- Возможность применения как альтернативного метода в соответствии с Европейской фармакопеей при условии валидации
- Рекомбинантная технология без использования лизата амебоцитов мечехвостов
- Высокая чувствительность – до 0,005 ЕЕ/мл
- Широкий диапазон количественного определения бактериальных эндотоксинов
- Отсутствие фактора G и реактивности относительно (1→3)-β-D-глюканов
- Высокая специфичность определения бактериальных эндотоксинов
- Автоматизированная обработка результатов
- Возможность высокопроизводительного тестирования
- Совместимость с микропланшетными ридерами и специализированным программным обеспечением