Реагент PyroSmart NextGen® для визначення бактеріальних ендотоксинів (рекомбінантний каскадний реагент, кінетичний хромогенний метод), Associates of Cape Cod. Inc.
PyroSmart NextGen® – високочутливий рекомбінантний каскадний реагент (rCR) для кількісного визначення бактеріальних ендотоксинів кінетичним хромогенним методом відповідно до вимог USP <86>. У Європейській фармакопеї метод з використанням rCR може застосовуватися як альтернативний до фармакопейного методу Ph. Eur. 2.6.14 «Бактеріальні ендотоксини» за умови відповідної валідації.
Реагент являє собою ліофілізовану суміш трьох рекомбінантних компонентів ферментативного каскаду – фактора C, фактора B та ферменту, що активує згортання, разом із хромогенним субстратом.
PyroSmart NextGen® забезпечує кількісне визначення бактеріальних ендотоксинів і може використовуватися для аналізу води, сировини, проміжної продукції, готових лікарських засобів та медичних виробів.
Принцип методу
Метод базується на активації рекомбінантного ферментативного каскаду бактеріальними ендотоксинами. У присутності ендотоксину активується фактор C, який послідовно активує фактор B, і фермент, що активує згортання. Активований фермент розщеплює хромогенний субстрат з утворенням забарвленого продукту. Зміну оптичної густини реєструє мікропланшетний ридер, а концентрацію бактеріального ендотоксину в досліджуваному зразку визначають за стандартною кривою. PyroSmart NextGen® не містить фактора G, тому (1→3)-β-D-глюкани не активують реакцію, що підвищує специфічність визначення бактеріальних ендотоксинів.
Основні характеристики
- Метод: кількісний кінетичний хромогенний
- Тип реагенту: рекомбінантний каскадний реагент (rCR)
- Діапазон стандартної кривої: 0,005–50 ОЕ/мл
- Максимальна чутливість: 0,001 МО/мл — при використанні пробіркового аналізатора Pyros Kinetix® Flex
- Температура проведення реакції: 37 ± 1 °C
- Формат аналізу: 96-лунковий мікропланшет
- Опрацювання результатів: автоматизоване
Проведення тесту
- Перед проведенням аналізу мікропланшетний ридер доводять до температури 37 ± 1 °C.
- Готують стандарт ендотоксину, негативний контроль, досліджувані зразки й позитивний контроль зразка.
- Ліофілізований реагент PyroSmart NextGen® відновлюють 2,8 мл спеціального буфера для відновлення.
- Відновлений реагент додають до лунок мікропланшета з досліджуваними зразками, стандартами та контролями.
- Планшет поміщають у мікропланшетний ридер і проводять кінетичне вимірювання при 37 ± 1 °C.
- Концентрацію бактеріальних ендотоксинів у досліджуваних зразках визначають за стандартною кривою.
Стабільність і зберігання
Ліофілізований реагент PyroSmart NextGen® зберігають за температури 2…8 °C. Термін придатності – 3 роки від дати виробництва за дотримання рекомендованих умов зберігання. Після відновлення реагент PyroSmart NextGen® необхідно використати протягом 3–20 хвилин у кімнатній температурі. Зберігання залишку відновленого реагенту для подальшого використання не передбачено виробником.
Комплексне рішення для тестування бактеріальних ендотоксинів
Ми пропонуємо повний набір компонентів для проведення аналізу:
- Рекомбінантний каскадний реагент PyroSmart NextGen® (rCR)
- Буфер для відновлення реагенту
- Контрольний стандарт ендотоксину (CSE)
- Вода для тестування бактеріальних ендотоксинів (LRW)
- 96-лункові мікропланшети
- Апірогенні наконечники
- Апірогенні пробірки
Переваги
- Відповідність вимогам USP <86>
- Можливість застосування як альтернативного методу відповідно до Європейської фармакопеї за умови валідації
- Рекомбінантна технологія без використання лізату амебоцитів мечохвостів
- Висока чутливість – до 0,005 ОЕ/мл
- Широкий діапазон кількісного визначення бактеріальних ендотоксинів
- Відсутність фактора G та реактивності щодо (1→3)-β-D-глюканів
- Висока специфічність визначення бактеріальних ендотоксинів
- Автоматизоване опрацювання результатів
- Можливість високопродуктивного тестування
- Сумісність із мікропланшетними ридерами та спеціалізованим програмним забезпеченням