Реагент Chromo-LAL® для определения бактериальных эндотоксинов (кинетический хромогенный метод), Associates of Cape Cod. Inc.
Chromo-LAL® – высокочувствительный реагент для количественного определения бактериальных эндотоксинов кинетическим хромогенным методом в соответствии с требованиями USP <85>, Европейской фармакопеи 2.6.14 и Японской фармакопеи. Это лиофилизированный лизат амебоцитов Limulus polyphemus, ко-лиофилизированный с хромогенным субстратом. Метод обеспечивает автоматизированное количественное определение эндотоксинов в широком диапазоне концентраций и подходит для анализа воды, сырья, промежуточной продукции, готовых лекарственных средств и медицинских изделий.
Chromo-LAL® используется в сочетании с микропланшетным ридером и специализированным программным обеспечением для построения стандартной кривой и расчета концентрации эндотоксинов в образцах.
Принцип метода
Метод основан на активации ферментативного каскада ЛАЛ-реагента бактериальными эндотоксинами. В присутствии эндотоксинов активируется серия ферментов, конечный из которых расщепляет хромогенный субстрат с образованием пара-нитроанилина (pNA), сопровождающийся развитием желтой окраски. Скорость развития цвета прямо пропорциональна концентрации эндотоксина в образце. Оптическая плотность измеряется по длине волны 405 нм, а концентрация эндотоксина определяется с помощью стандартной кривой.
Основные характеристики
- Метод: количественный кинетический хромогенный
- Диапазон стандартной кривой: 0,005–50 EU/мл
- Максимальная чувствительность: 0,005 EU/мл
- Длина волны измерения: 405 нм
- Температура инкубации: 37 ± 1 °C
- Соотношение образца: реагент – 1:1
- Формат анализа: 96-луночный микропланшет
- Возможность автоматизированного расчета результатов
Проведение теста
Для анализа образец вносят в микропланшет и предварительно термостатируют при 37 ± 1 °C. Реагент Chromo-LAL® восстанавливают водой для ЛАЛ-реагентов (LRW) или буфером Glucashield® и добавляют к каждой лунке в соотношении 1:1 с образцом. После смешивания планшет инкубируют в ридере при 37 ± 1 °C с кинетическим измерением оптической плотности при 405 нм. Полученные результаты автоматически сравниваются со стандартной кривой для определения концентрации эндотоксинов.
Стабильность
Неоткрытые реагенты хранят при температуре 2…8 °C до истечения срока годности. После восстановления реагент стабилен:
- До 24 часов при 2…8 °C
- До 14 дней при -20 °C или ниже
Допускается один цикл замораживания и размораживания без потери рабочих характеристик.
Комплексное решение для тестирования LAL
Мы предлагаем полный набор компонентов для проведения анализа:
- Chromo-LAL®
- Контрольный стандарт эндотоксина (CSE)
- Буфер Glucashield®
- Вода для ЛАЛ-реагентов (LRW)
- Апирогенные пробирки и 96-луночные микропланшеты
- Апирогенные наконечники
- Апирогенные пробирки
Преимущества
- Соответствие международным фармакопейным требованиям
- Высокая чувствительность к 0,005 EU/мл
- Количественное определение эндотоксинов в широком диапазоне концентраций
- Автоматизированная обработка результатов
- Подходит для высокопроизводительного тестирования
- Возможность выявления ингибирования и усиления реакции
- Интеграция с современными микропланшетными ридерами и программным обеспечением