Реагент Chromo-LAL для визначення бактеріальних ендотоксинів (кінетичний хромогенний метод), Associates of Cape Cod. Inc.
Chromo-LAL® – високочутливий реагент для кількісного визначення бактеріальних ендотоксинів кінетичним хромогенним методом відповідно до вимог USP <85>, Європейської фармакопеї 2.6.14 та Японської фармакопеї. Це ліофілізований лізат амебоцитів Limulus polyphemus, ко-ліофілізований із хромогенним субстратом. Метод забезпечує автоматизоване кількісне визначення ендотоксинів у широкому діапазоні концентрацій та підходить для аналізу води, сировини, проміжної продукції, готових лікарських засобів і медичних виробів.
Chromo-LAL® використовується в поєднанні з мікропланшетним ридером і спеціалізованим програмним забезпеченням для побудови стандартної кривої та розрахунку концентрації ендотоксинів у зразках.
Принцип методу
Метод базується на активації ферментативного каскаду ЛАЛ-реагенту бактеріальними ендотоксинами.
У присутності ендотоксинів активується серія ферментів, кінцевий із яких розщеплює хромогенний субстрат з утворенням пара-нітроаніліну (pNA), що супроводжується розвитком жовтого забарвлення.
Швидкість розвитку кольору прямо пропорційна концентрації ендотоксину у зразку. Оптична густина вимірюється за довжини хвилі 405 нм, а концентрація ендотоксину визначається за допомогою стандартної кривої.
Основні характеристики
- Метод: кількісний кінетичний хромогенний
- Діапазон стандартної кривої: 0,005–50 EU/мл
- Максимальна чутливість: 0,005 EU/мл
- Довжина хвилі вимірювання: 405 нм
- Температура інкубації: 37 ± 1 °C
- Співвідношення зразок: реагент – 1:1
- Формат аналізу: 96-лунковий мікропланшет
- Можливість автоматизованого розрахунку результатів
Проведення тесту
Для проведення аналізу зразок вносять у мікропланшет і попередньо термостатують за 37 ± 1 °C. Реагент Chromo-LAL® відновлюють водою для ЛАЛ-реагентів (LRW) або буфером Glucashield® і додають до кожної лунки у співвідношенні 1:1 зі зразком. Після змішування планшет інкубують у ридері за 37 ± 1 °C з кінетичним вимірюванням оптичної густини при 405 нм. Отримані результати автоматично порівнюються зі стандартною кривою для визначення концентрації ендотоксинів.
Стабільність
Невідкриті реагенти зберігають за температури 2…8 °C до закінчення терміну придатності. Після відновлення реагент стабільний:
- До 24 годин за 2…8 °C
- До 14 днів за температури -20 °C або нижче
Допускається один цикл заморожування й розморожування без втрати робочих характеристик.
Комплексне рішення для LAL-тестування
Ми пропонуємо повний набір компонентів для проведення аналізу:
- Chromo-LAL®
- Контрольний стандарт ендотоксину (CSE)
- Буфер Glucashield®
- Вода для ЛАЛ-реагентів (LRW)
- Апірогенні пробірки та 96-лункові мікропланшети
- Апірогенні наконечники
- Апірогенні пробірки
Переваги
- Відповідність міжнародним фармакопейним вимогам
- Висока чутливість до 0,005 EU/мл
- Кількісне визначення ендотоксинів у широкому діапазоні концентрацій
- Автоматизована обробка результатів
- Підходить для високопродуктивного тестування
- Можливість виявлення інгібування та посилення реакції
- Інтеграція із сучасними мікропланшетними рідерами та програмним забезпеченням